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强致癌物质黄曲霉毒素M1检测方案

发布时间: 2019-03-29  点击次数: 382次

黄曲霉毒素主要存在于谷物、坚果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些与人类血液,动物饲料相关的产品中。霉菌的生长并不一定表明黄曲毒素的存在,因为黄曲霉毒素只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。黄曲霉毒素B类具有蓝色荧光,G类具有绿色荧光。除了蔬菜中常见的(B1,B2,G1,G2),还有存在喂食了有毒饲料的奶牛的牛奶中的黄曲霉毒素M,其中毒性高的M的代谢物为4-羟基化的产物Bs.黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物,也是一种强致癌物质。其危害巨大,人类日常消费食品中如牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡。毒性是As2O3的100倍其实主要是指黄曲霉毒素比As2O3毒。

目前来讲,Aflatoxin M1的检测方法有液相色谱法(HPLC),酶联免疫检测法等。液相色谱法可以的检测奶制品中黄曲霉毒素的微小含量。而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。

作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商, 2010年泰乐祺科技投巨资成立了"检测应用实验室",重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题,以期望快速提出解决方案。近期应针对奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题,泰乐祺科技提供了两种检测方案,可以帮助企业轻松应对奶中黄曲霉毒素M1的*检测。

 

液相色谱法:

根据国标《GB 5413.37—2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定

 实验用前处理:

实验仪器和好耗材包括:

恒温水浴锅 溶剂过滤器(带真空泵)1000ml  高速匀质器 黄曲霉毒素免疫M1亲和柱玻璃纤维滤纸 玻璃注射器 无荧光特性玻璃试管 空气压力泵 超声波清洗机  定量滤纸 量筒 样品瓶 容量瓶 移液器或移液管

  实验用试剂:色谱乙腈色谱甲醇 氢氧化钠 石油醚 超纯水或去离子水等等

HPLC条件:

液相色谱仪

 

色谱柱

C18柱,150*4.6mm,5um

流动相

乙腈-水(25:75)

荧光检测器:

激发波长365nm,发射波长435nm;

柱  温

室温

流速

1.0ml/min

进样量

20ul

出峰时间

10分钟左右

 

样品取样:真菌毒素分析的大误差来源是样品的收集和取样过程,所以必需保证样品收集和取样具有代表性。

样品前处理:分不同样品

牛奶  水浴加热至40度,离心用上清液过柱净化;

乳粉和粉状婴幼儿配方食品:称取适量奶粉样品,用于蒸馏水中,混合均匀使其充分溶解,离心离心用上清液过柱净化;

发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型):称取适量奶粉样品,用于蒸馏水中,调节PH值至微碱性,高速均质器匀浆,水浴加热后离心,取上清液混合均匀使其充分溶解,离心离心用上清液过柱净化;

干酪:称取适量切细或粉碎,过筛用加纯水溶解,高速均质器匀浆,超声提取后收集上清液,然后用石油醚进行两次萃取,然后用适宜的有机溶液萃取,取若干上清液过柱净化

奶粉样品,用于蒸馏水溶解中,调节PH值至微碱性,水浴加热后离心,取上清液混合均匀使其充分溶解,离心离心用上清液过柱净化;

奶油:称取适量加甲醇水溶解,震荡后分页漏斗取下层溶液,蒸干后溶于水用于过柱净化。

免疫柱净化步骤:完全符合GB/T 18980-2003

┅┅取出免疫亲和层析柱, 恢复至室温,将上方塞子取出斜剪断,再插回亲和柱上。

┅┅将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器;

┅┅将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;

┅┅更换玻璃注射器与亲和柱连接,在注射器中加入10ml水,调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。

┅┅准确加入4mL色谱级乙腈洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测。

:收集管中的洗脱液即为纯化后的样品,可直接用ELISA,荧光和液相等方法检测。

HPLC 检测需要仪器与耗材

产品名称

说明

规格

黄曲霉毒素M1固体标准品

参比对照使用

100ug 1mg  

黄曲霉毒素M1液体标准品

浓度0.5ug/ml, 溶于乙腈

1ml 

PriboFast 黄曲霉素M1免疫亲和柱

用于 样品前处理柱 分析黄曲霉

25/50T

PriboFast泵流操作架(8位)

用于免疫亲和柱净化样品处理,方便控制流速

 

黄曲霉毒素检测玻璃纤维滤纸

用于去除HPLC检测时部分杂峰,有效提高灵敏度。110,1.5um

100P

 

不锈钢均质器

 高速匀浆样品,有效提高萃取效率

 

旋转蒸发仪-超声波发生器

 

 

酶联免疫检测法:符合国家标准

酶联免疫检测法采用竞争ELISA,在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1抗原,加入样本(或黄曲霉毒素M1标准品溶液)及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素M1与预包被在板孔上的黄曲霉毒素M1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液,读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素M1抗原的含量成负相关。对照标准曲线,即可得出相应残留物黄曲霉毒素M1的含量。

样品处理

牛奶 直接离心取上清液用于检测

奶粉及其他固状奶制品:需要溶解于去离子水中,离心取上清液用于检测

试剂盒检测时间:30分钟+30分钟

交叉反应率:

Aflatoxin M1

100%

Aflatoxin B1

8%

Aflatoxin B2

10%

Aflatoxin G1

7%

Aflatoxin G2

5%

 

ELISA 方法检测需要:

 

说明

 

PriboFast 黄曲霉毒素M1酶联免疫检测试剂盒

检测范围 (0.1 ppb -8.1ppb)

96孔

雷勃半支灭菌移液器(彩色)

多个量程:0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul

雷勃八道半支灭菌移液器

量程: 5-50ul; 50-300ul

酶标仪

进口、国产仪器,

  分析人员要求:

化学分析仪器及其相关专业或有液相色谱仪操作经验的人员。

 

注:作为面向提供霉菌毒素检测技术解决方案的主要服务商之一,PriboLab凭借强大的研发团队和霉菌毒素检测技术的研究,为农业生产、食品加工与粮食、饲料工业等行业提供专业的真菌毒素检测技术产品与技术服务。北京泰乐祺作为 PriboLab在中国的合作伙伴,积极为国内客户提供的霉菌毒素检测技术与产品服务,为国内客户提供适宜的霉菌毒素检测方案,帮助国内客户建立的霉菌毒素项目检测平台。

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