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你想知道免疫亲和柱使用时有哪些技巧和要求吗

发布时间: 2022-07-18  点击次数: 34次
  免疫亲和柱基于抗原抗体反应,特异性抗体连接在柱体内,选择性吸附样品中的待检物,杂质不被吸附,流出柱外,柱上结合的目标物再被特定的洗脱液洗下来,可以用于液相色谱分析或者ELISA含量测定,是一种高效的前处理柱。可选择性吸附样品液中的毒素,从而对样品起到非常针对性的纯化作用,经过柱净化后的样品液可直接用于HPLC分析。它与HPLC配合使用可达到快速测定的目的,以改善信噪比,提高检测方法的准确度。
  免疫亲和柱使用技巧:
  1、上柱的样品溶液应该保持酸碱中性、无悬浮物、甲醇浓度不宜过高;
  2、若样品为复杂样品,例如高蛋白、高油脂、酸性样品,可以将提取液分两次提取样品,可以提高提取效果;
  3、样品过柱及甲醇洗脱速度要慢且均匀,约每秒1-2滴;
  4、抗原抗体发生反应的最佳温度是在25℃左右,实验需要的环境温度最好是室温24℃-28℃,太高或太低的温度都会对回收率有一定的影响。在使用前需要恢复至室温再进行实验;
  5、不要在无水状态下,琼脂容易干燥缩,影响质量;
  6、储存条件为4℃-8℃。切记0℃以下的低温,因为缓冲液冻结,会严重影响亲和柱内的物理结构,对质量影响很大;
  7、洗脱一般选择试剂甲醇,为增强洗脱效果可加大甲醇体积。
  免疫亲和柱的选购要求:
  柱容量抗体:抗体的性质决定了净化效果,抗体交叉反应多,净化的物质相对也多。厂家生产亲和柱会从成本角度考虑,那么就会出现不同的柱容量,亲和柱上连接的抗体越多,柱容量也相应增加,对客户来说高柱容量对于高污染样品减少了净化次数,降低了成本。
  重要的指标:添加回收率是亲和柱的重要回收指标,再样品提取方法适当的条件下,添加回收是检测亲和柱性能的重要参考指标,请注意,空白样品的污染值应远远小于添加值,这样会减少误差。一般添加回收率应在80-110%之间为合格的亲和柱产品。
  柱的吸附量:由于小分子在溶液中会吸附到凝胶上,在检查了添加回收率之后还应柱的吸附量,一般我们在洗脱步骤会给客户提供可靠的说明。
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