小麦中麦角生物碱检测解决方案

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麦角生物碱 固相净化柱柱液相色谱串联质谱法

介绍:

麦角菌核是以麦角suan为基本结构的一系列生物碱衍生物，如麦角新碱、麦角an、麦角克碱、麦角毒碱、麦角生碱、麦角辛、麦角隐亭、麦角考宁及它们的差向异构体等。被麦角菌污染的谷物研磨加工成面粉后通常含有高浓度的麦角碱。摄食受污染的食品或饲料可能对人和动物产生严重影响。多量致病，少量治病，麦角碱亦可作为药用，适用于子宫、神经系统、心血管。

背景:

在食品方面的研究领域中，对麦角生物碱的研究，常见的方法有:比色分析法(Colorimetry)，但此方法只适合总碱含量测定，不能区分麦角生物碱的差向异构体;薄层色谱分析法(Thinlayerchromatography,TLC)分析方法简便、快速、成本低，但灵敏度低、重现性差，因此目前多用于定性分析及半定量分析;酶联免疫吸附法(ELISA)，具有检测时间短、特异性强、仪器设备和样品前处理简单的特点，适用于大批量样品筛查与现场检测，然而也存在酶标记抗体保存时间有限且用量大，交叉反应;气相色谱法

( Gas Chromatography，GC)一般要求被分析物在一定温度下易气化且在气化温度下较稳定。采用GC检测肽型麦角生物碱时，肽型麦角生物碱在进样口温度(250~300℃)下不稳定、易分解，肽型麦角生物碱会发生热分解，产生缩氨酸部分。利用质谱法(Mass spectrometer,MS)可以区分肽型麦角生物碱和其他麦角生物碱，但对于肽型麦角生物碱的差向异构体，如:麦角an和麦角an宁，则不能进行区分;高效液相色谱分析法(Highperformance liquid chromatography,HPLC),该方法具有分析效率高、重现性好、专一性强、灵敏度高等优点，是目前常用的一种麦角生物碱的检测方法，该方法不宜鉴定新化合物、区分特征麦角生物碱及其异构体;综合来说，液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)应用广泛，这种方法能定量分析麦角生物碱的同时确定麦角生物碱的相对分子质量，还可能得到新的化合物。本方案参考 GB 2715-2016《食品安全国家标准粮食》采用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)。

1.仪器设备

1.1.液相色谱串联质谱仪

1.2.离心机:转速能达到10000r/min。

1.3.超声波/斡旋混合或摇床。厂家:Pribolab 型号:DMT-2500

1.4.分析天平:0.01g。

1.5.泵流操作架。厂家:Pribolab

1.6.固相净化柱。厂家:Pribolab

2.实验过程

2.1. 提取与分离纯化

提取粉碎样品后，称取4g于50mL离心管中，加入20mL 乙腈-碳酸铵混合溶液(84/16,v/v),振荡提取30 min,4℃,10000r/min，离心10 min,上清液过滤，待纯化。纯化取4mL滤液加入试管中，将试管缓慢推入Pribolab®MFC333麦角生物碱固相净化柱，直至试管底部，量取净化柱管内洗脱液 0.5 mL于另一试管中，再加入0.5mL碳酸铵溶液(3 mmol/L)，混合均匀，通过微孔滤膜(0.2 μm)过滤至进样小瓶，待上机分析测定。

2.2.测定

2.2.1.液相色谱条件

色谱柱:Gemini-NX 3u C18 ( 100 mm x2.0 mm) (i.d. )，3 μm )

液相色谱柱或相当者。

流动相:A-乙腈，B-碳酸铵溶液(3 mmol/L)。

柱温:30℃。

流速:0.3 mL/min.

进样量:5 μL.

梯度洗脱条件见表1.

2.2.2.质谱条件

电离方式:电喷雾电离(ESI)。

扫描方式:正离子扫描。

电喷雾电压、离子源温度、雾化气、辅助气、气帘气和碰撞气均为高纯氮气，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。

监测方式:多反应监测(MRM)。

结论:

本文以乙腈-碳酸铵混合溶液(84/16，v/v)提取样品，Pribolab 固相净化柱净化，经液相色谱串联质谱法分离检测后，可同时测定小麦中多种麦角生物碱。实验通过对检测条件、样品前处理过程及固相净化手段的优化，使得该方法应用于小麦基质中均能得到较好的回收效果及重现性。本方法操作简单、可行性强、回收率高、结果准确、检出限低，方法学各项技术指标均满足定性、定量分析要求，适用于小麦中麦角生物碱的测定。