1.材料准备
底板及垫料选择：选取合适的底板，如塑料或硬质纸板等，作为检测卡的基础支撑。同时准备样品垫、玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水垫等材料，确保它们的质量符合要求且相互匹配。
抗体与配体准备：准备好玉米赤霉烯酮的特异性抗体、羊抗鼠抗体（用于质控线包被）、荧光微球标记的玉米赤霉烯酮单克隆抗体以及相关的抗原、偶联剂等生物试剂。这些试剂的活性和纯度对检测卡的性能至关重要。
化学试剂与缓冲液配制：配置各种所需的化学试剂，如碳二亚胺（EDC）、N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）等用于蛋白偶联反应；准备不同 pH 值的缓冲液，如磷酸盐缓冲液（PBS）、MES 缓冲溶液等，用于调节反应体系的酸碱度。
2.硝酸纤维素膜处理
检测线包被：将玉米赤霉烯酮半抗原-载体蛋白偶联剂通过特定的方法固定在硝酸纤维素膜上，形成检测线。例如，先将玉米赤霉烯酮半抗原溶解于 DMF 中，加入 EDC，然后将制得的溶液逐滴缓慢滴加到溶解有 BSA 的 CB 溶液中，搅拌反应后，再用 PBS 透析，得到 ZEAO 偶联产物，将其包被于硝酸纤维素膜上形成检测线。
质控线包被：将羊抗鼠抗体包被于硝酸纤维素膜上，形成质控线，以监测检测过程中试剂的有效性和操作的正确性。
3.乳胶微球与抗体偶联
乳胶微球预处理：在乳胶微球中加入 MES 缓冲溶液，混匀后离心洗涤，去除杂质和未反应的基团。
抗体偶联：按照一定的比例将 NHS 和 EDC 加入到乳胶微球中，混匀后孵育一段时间，使乳胶微球表面活化。然后离心洗涤、去上清液，加入 ZEA 抗体至终浓度为 0.6mg/mL，混匀后反应一段时间。再次离心去除上清，用 2％的 BSA 进行封闭和清洗，最后将乳胶微球悬浮于储存缓冲溶液中，混匀并保存于冰箱中备用。
4.组装与干燥
组件粘贴固定：将样品垫、已包被好的硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘贴固定在底板上，确保各组件之间紧密连接且位置准确，避免出现气泡或缝隙。各组件的长度和搭接宽度需符合设计要求，以保证检测过程中液体能够顺利通过毛细管作用在各组件间流动。
干燥处理：将组装好的检测卡在一定温度下进行烘干过夜处理，使各组件之间的粘贴更加牢固，同时也有利于去除残留的水分和有机溶剂。
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